التحضيرات المجهرية الضوئية ؛ النظرية والتطبيق

وقع من الطلبة الذين يدرسون مادة التحضير المجهري، إعداد شرائح مجهرية تساعد في دراسة الخلايا والأنسجة والأعضاء. ويمكن إتمام هذا، بأربع طرائق تحضير رئيسية هي: التقطيع والمسح أو الفرش والهرس أو الدعك والتحضيرات الكاملة . وسنوجز فيما يلي هذه الطرائق الأربعة، ومن ثم سيتم تفصيلها بشكل موسع في فصول لاحقة.1. التقطيع: في هذه الطريقة يتم قطع الأنسجة، إلى مقاطع رقيقة جداً 10mµ)). ولكون كثير من الأنسجة النباتية والحيوانية طرية يصعب قطعها، فيجب أن تقسّى قبل عملية القطع، وذلك بتثبيت النسيج بمواد كيماوية مناسبة لحفظه. ولتحضير النسيج للقطع يجب غسل المثبت عنه، ثم إزالة الماء منه، وترويقه، وطمره في الشمع ليتشربه خلال خلاياه. وهكذا يعمل الشمع كدعامة داخل النسيج، تُمكّن من قطعه إلى مقاطع يصل سمكها إلى عشرة ميكرومترات. وبعدها، توضع المقاطع على شرائح مجهرية، وتصبغ وتغطى بأغطية زجاجية رقيقة. وفي الحالات الطارئة، التي يُحتاج فيها إلى شرائح بسرعة، كما في الدراسات المرضية، يمكن الاستغناء عن كل ما سبق ذكره في تحضير المقاطع، بتجميد النسيج الذي يسمى خزعة ثم قطعه وصبغه في الحال. والمقاطع تكون إما طولية أو عرضية، أو جبهية (أمامية) .2. المسح أو الفرش: في هذه الطريقة، يمسح السائل، كالدم أو البول، أو مزرعة البكتيريا، أو مسحة من الحنجرة أو المهبل، ويفرش كطبقة رقيقة على شريحة زجاجية، ويمكن عمل ذلك من الأنسجة الرخوة الطازجة، كالنخاع الشوكي والحويصلات المنوية. وتصبغ المسحات وتجفف في الهواء ثم تغطى.3. الهرس أو الدعك: بعض الأنسجة ليست رخوة بدرجة تكفي لفرشها على الشرائح، وليست قاسية بما فيه الكفاية، ليتسنى قطعها دون طمرها في الشمع. لذا، فإن الهرس هو الطريقة المثلى لتحضيرها، وذلك بفصل الخلايا عن بعضها، عبر تفكيك المادة بين الخلوية. وفي العادة، تعمل تحضيرات دائمة أو مؤقتة بهذه الطريقة. ومن الأنسجة التي تحضر بهذه الطريقة، الأنسجة النباتية كالقمة النامية للساق والجذر والمبايض والبتلات. ومن الأنسجة الحيوانية الغدد اللعابية لذبابة الفاكهة Drosophila Melanogaster .4. النماذج الكاملة Whole Mounts: في هذه الطريقة توضع العينة كاملة، إذا كانت صغيرة وشفافة بشكل يسمح بوضعها على شريحة، وتجري عليها عليمات التثبيت، وإزالة الماء، والترويق والصبغ والتغطية كما في المقاطع. وهذه الطريقة مفيدة في تحضير الكائنات الأولية أو الطفيليات أو الأجنة الصغيرة.وإذا كانت العينة كبيرة الحجم، فيؤخذ قسم منا يتناسب وحجم الحيّز المتاح على الشريحة. سنعالج في الجزء الأول من هذا الكتاب الأسس النظرية لخطوات تحضير الشرائح المجهرية. أما في الجزء الثاني، فسنتعامل مع التطبيقات العملية في هذا المجال.الجزء الاول: الاسس النظرية1. التثبيت2. الغسل وإزالة الماء والترويق3. التشريب والطمر4. تقطيع وتحميل الأنسجة5. صبغ الأنسجة6. تغطية المقاطع ووسم الشرائح7. طرائق المسح والهرس والتجميد8. النماذج الكاملةالجزء الثاني: التطبيقات9. الأدوات والزجاجيات10. الأجهزة اللازمة في التحضير المجهري11. مزيلات الماء ووسائط الترويق12. وسائط التشريب والطمر13. محاليل الصبغ والتمييز14. وسائط لصق وتغطية المقاطع15. تحضير مسحة دم إنسان16. تحضير هرسة من الغدد اللعابية لذبابة الفاكهة17. تحضير هرسة من قمة جذر البصل18. تحضير نماذج كاملة19. تحضير مقاطع من أنسجة حيوانية20. تحضير مقاطع من أنسجة نباتية21. تحضير مقاطع متسلسلة